液相色谱流动相的相关介绍河蟹养殖

流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的重要程度。那么流动相都需要注意什么呢?

01、过滤溶剂

溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂(缓冲盐)配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择(反光面朝上)，过滤水溶性流动相时(如甲醇/水)，先用1～2mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。

02、保持储液瓶的清洁

用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

03、保证溶剂的质量

一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

一些因流动相引起的常见问题

01、流动相脱气不充分

流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。可试用下列方法解决问题：流动相再脱气;采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用;改系统内混合为系统外预混合。

02、流动相供给不畅

流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。不管如何，流动相都需要重新过滤。

流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。如果流速大于10mL/min，常会出现这种现象。

使用下列方法解决：

(1)使用低流速;

(2)换大孔径的过滤器;

(3)增加进液管道内径;

(4)抬高或加压储液器;

(5)不用过滤器，但流动相一定要先过滤;

(6)储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。应松开盖子或留有1mm的缝隙;

(7)进液管道阻塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的。其它问题包括渗漏或接头松动、泵部件损坏等，都能引起供液不正常。

03、流动相和储液器被污染

由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰。用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一个大的伪峰。有时基线噪音突然增大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久(通宵)所造成的。新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。

脏的储液器会污染清洁的流动相。每种流动相备有专用的储液器，或者定期报废储液器。

流动相污染来自这几个方面

04、试剂质量不高，玻璃器皿不合格;

微生物的影响;

配制流动相时操作不当等;

因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂;

玻璃器皿按规定清洗干净;

为防止微生物生长，每天要用甲醇清洗系统;

怀疑系统内生长了微生物，可用稀硝酸冲洗即可(注意不要损坏柱和管道系统);

真空脱气时防止泵油带入流动相;

用清洁的惰性塞子、搅棒、过滤器和玻璃器皿配制流动相;

已经污染的流动相一定要废弃掉。

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